Валидация разработанной иммуноферментной тест-системы для лабораторной диагностики острого вирусного гепатита Е

Цель исследования. Определить специфичность и чувствительность разработанного отечественного иммуноферментного набора «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» для выявления иммуноглобулинов классов М к вирусу гепатита Е (ВГЕ) в сыворотке крови людей в реальных клинических условиях.

Материалы и методы. Для определения чувствительности и специфичности использовались зарегистрированные промышленные образцы набора «ИФА-анти-ВГЕ IgМ», выпущенные УП «Хозрасчетное опытное производство Института биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси» (УП «ХОП ИБОХ НАН Беларуси») согласно ТУ BY 100185093.093-2023. На базе клинико-диагностической лаборатории УЗ «Городская клиническая инфекционная больница» г. Минска исследовались 214 сывороток крови пациентов с установленным наличием антител к вирусу гепатита А, вирусу гепатита С, антигеном вируса гепатита B, гиперлипидемией, антителами класса М к цитомегаловирусу и повышенным содержании ревматоидного фактора (РФ). Для определения чувствительности и специфичности набора исследовались 72 пробы сывороток в параллели с референсными наборами «Вектогеп Е-IgМ» («Вектор-Бест», Россия).

Результаты. При использовании выпущенного в промышленных условиях набора «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» (ТУ BY 100185093.093-2023) установлено отсутствие неспецифического перекрестного взаимодействия между сорбированными рекомбинантными полипептидами ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа и белками в пробах пациентов с антителами к гепатиту С, гепатиту А, антигеном вируса гепатита В, плазме крови с гемолизом и хилезом, образцах с повышенным содержанием РФ и наличием антител класса М к цитомегаловирусу. При оценке показателей чувствительности и специфичности на сыворотках крови в реальных клинических условиях установлены высокие показатели чувствительности — не менее 99 % и специфичности — не менее 99 %, что свидетельствует о возможности применения набора в практической деятельности лабораторий учреждений здравоохранения.

Заключение. Зарегистрированная и выпускаемая первая отечественная тест-система «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» для определения иммуноглобулинов класса М к ВГЕ в сыворотке крови людей методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) обладает высокими показателями аналитической надежности: чувствительность — не менее 99 %, специфичность — не менее 99 %

1. Yalow RS, Berson SA. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man. J Clin Invest. 1960;39(7):1157-1175. DOI: https://doi.org/10.1172/JCI104130

2. Engvall E, Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry. 1971;8(9):871-874. DOI: https://doi.org/10.1016/0019-2791(71)90454-X

3. Van Weemen BK, Schuurs AHWM. Immunoassay using antigen–enzyme conjugates. FEBS Lett. 1971;15(3):232-236. DOI: https://doi.org/10.1016/0014-5793(71)80319-8

4. Нго Т., Ленхофф Г. Иммуноферметный анализ. Пер. с англ. М.: Мир; 1988. Ngo T, Lenhoff G. Immunoenzyme analysis. Translated from English. Moscow: Mir; 1988. (In Russ.).

5. Егоров А.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высш. школа; 1991.

6. Жебентяев А.И., Каткова Е.Н. Иммуноферментный метод анализа. Вестник фармации. 2013;60(2):90-97. [дата обращения 2025 июнь 30]. Режим доступа: https://cyberleninka.ru/article/n/immunofermentnyy-metod-analiza

7. Черношей Д.А., Канашкова Т.А. Методы иммуноанализа, основанные на применении меченых компонентов. Учеб. -метод. пособие. Минск; 2007. [дата обращения 2025 июнь 30]. Режим доступа: https://rep.bsmu.by/handle/BSMU/3993

8. Crowther JR. The ELISA Guidebook. Humana Press; 2001.

9. Voller A, Bidwell DE, Bartlett A. Enzyme immunoassays in diagnostic medicine. Theory and practice. BulL World Health Organ. 1976;53(1):55-65.

10. Lequin RM. Enzyme immunoassay (EIA)/enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Clinical Chemistry. 2005;51(12): 2415-2418. DOI: https://doi.org/10.1373/clinchem.2005.051532

11. Wild D. The Immunoassay Handbook: Theory and Applications of Ligand Binding, ELISA and Related Techniques. 4th Edition. Chapter on competitive assays. 2013.

12. Rein DB, Stevens GA, Theaker J, et al. The global burden of hepatitis E virus genotypes 1 and 2 in 2005. Hepatology. 2012;55(4):988-997. DOI: https://doi.org/10.1002/hep.25505

13. Li B, Wu H, Miao Z, et al. Codon Usage of Hepatitis E Viruses: A Comprehensive Analysis. Front Microbiol. 2022;13:938651. DOI: https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.938651

14. Meng XJ. Hepatitis E virus: animal reservoirs and zoonotic risk. Vet Microbiol. 2010;140:256-265. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2009.03.017

15. Pavio N, Meng XJ, Renou C. Zoonotic hepatitis E: animal reservoirs and emerging risks. Vet Res. 2010;41:46. DOI: https://doi.org/10.1051/vetres/2010018

16. Vina-Rodriguez A, Schlosser J, Becher D, et al. Hepatitis E virus genotype 3 diversity: phylogenetic analysis and presence of subtype 3b in wild boar in Europe. Viruses. 2015;7(5):2704-2726. DOI: https://doi.org/10.3390/v7052704

17. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Доценко В.В., Амиантова И.И., и др. Разработка рекомбинантного белка капсида вируса гепатита Е третьего генотипа: клонирование, экспрессия, очистка, оценка антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019;96(1):10-17. DOI: http://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-1-10-17

18. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Милованова А.В., Аммур Ю.И. и др. Получение рекомбинантного белка ORF3 вируса гепатита Е 3 генотипа и оценка его антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018;95(5):46-53. DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-5-46-53

19. Задора И.С., Жаворонок С.В., Алаторцева Г.И., Щербань А.И., Притворова Л.Н., Нестеренко Л.Н., Давыдов В.В. и др. Разработка и оценка иммуноферментной тест-системы для диагностики острого вирусного гепатита Е. Проблемы здоровья и экологии. 2025;22(2):35-45. DOI: https://doi.org/10.51523/2708-6011.2025-22-2-04

20. Задора И.С., Жаворонок С.В., Алаторцева Г.И., Щербань А.И., Давыдов В.В., Лухверчик Л.Н. и др. Разработка иммуноферментной тест-системы «ИФА-анти-ВГЕ IgG» для определения иммуноглобулинов класса G к вирусу гепатита Е в сыворотке крови людей. Лабораторная диагностика Восточная Европа. 2025;14(3):455-467. DOI: https://doi.org/10.34883/PI.2025.14.3.024