Разработка и оценка иммуноферментной тест-системы для диагностики острого вирусного гепатита Е

Цель исследования. Разработать отечественную иммуноферментную тест-систему для определения иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита Е (ВГЕ) в сыворотке крови людей «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» с высокой чувствительностью и специфичностью.

Материалы и методы. База для данной научной работы — УЗ «Городская клиническая инфекционная больница» г. Минска. Качественное определение антител класса М в образцах сывороток крови людей осуществляли методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) с применением референсных наборов — «ИФА-АНТИ-HEV-IgМ», Вектогеп Е-IgМ. Для конструирования национальной тест-системы для качественного выявления анти-ВГЕ-IgМ использовались разборные 96-луночные полистироловые планшеты; рекомбинантные антигены — аналоги белка ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа; конъюгированные с пероксидазой хрена антитела к IgМ человека; постпокрывающий раствор; раствор для разведения сывороток и раствор для разведения конъюгата.

Результаты. Определены оптимальные концентрации для сорбции белков ОRF2 и ОRF3, составляющие 2 мкг/мл и 1 мкг/мл соответственно, установлено время инкубации с тетраметилбензидином (ТМБ) — 20 минут. Диагностическая чувствительность тест-системы составила не менее 99 %, диагностическая специфичность — не менее 99 %. Показатель внутрисерийной воспроизводимости составил 92,3 %, межсерийной воспроизводимости — 86,1 %. Разработаны и утверждены технические условия ТУ BY 100185093.093-2023, Инструкция по применению набора реагентов тест-система «ИФА-анти-ВГЕ-IgМ человека» для определения маркеров острого вирусного гепатита Е в сыворотке крови людей методом иммуноферментного анализа.

Заключение. Разработана первая отечественная тест-система для определения иммуноглобулинов класса М к ВГЕ в сыворотке крови людей «ИФА-анти-ВГЕ-IgМ» методом непрямого ИФА. Проведены лабораторные и технические испытания экспериментального образца тест-системы, показавшие ее высокую диагностическую чувствительность, специфичность и воспроизводимость. Утверждена нормативно-техническая документация на тест-систему.

1. Purdy MA, Drexler JF, Meng XJ, Norder H, Okamoto H, Van der Poel WHM, et al. ICTV Virus Taxonomy Profile: Hepeviridae 2022. J Gen Virol. 2022 Sep;103(9). DOI: https://doi.org/10.1099/jgv.0.001778

2. Rein DB, Stevens GA, Theaker J, Wittenborn JS, Wiersma ST. The global burden of hepatitis E virus genotypes 1 and 2 in 2005. Hepatology. 2012 Apr;55(4):988-997. DOI: https://doi.org/10.1002/hep.25505

3. Li B, Wu H, Miao Z, Hu L, Zhou L, Lu Y. Codon Usage of Hepatitis E Viruses: A Comprehensive Analysis. Front Microbiol. 2022 Jun 21;13:938651. DOI: https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.938651

4. Marano G, Vaglio S, Pupella S, Facco G, Bianchi M, Calizzani G, et al. Hepatitis E: an old infection with new implications. Blood Transfus. 2015 Jan;13(1):6-17. DOI: https://doi.org/10.2450/2014.0063-14

5. Aslan AT, Balaban HY. Hepatitis E virus: Epidemiology, diagnosis, clinical manifestations, and treatment. World J Gastroenterol. 2020 Oct 7;26(37):5543-5560. DOI: https://doi.org/10.3748/wjg.v26.i37.5543

6. Meng XJ. Hepatitis E virus: animal reservoirs and zoonotic risk. Vet Microbiol. 2010 Jan 27;140(3-4):256-265. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2009.03.017

7. Pavio N, Meng XJ, Renou C. Zoonotic hepatitis E: animal reservoirs and emerging risks. Vet Res. 2010 Nov-Dec;41(6):46. DOI: https://doi.org/10.1051/vetres/2010018

8. Vina-Rodriguez A, Schlosser J, Becher D, Kaden V, Groschup MH, Eiden M. Hepatitis E virus genotype 3 diversity: phylogenetic analysis and presence of subtype 3b in wild boar in Europe. Viruses. 2015 May 22;7(5):2704-2726. DOI: https://doi.org/10.3390/v7052704

9. Жаворонок С.В., Карпов И.А., Михайлов М.И., Арабей А.А., Кашкур Ю.В., Кюрегян К.К. [и др.]. Интенсивность эпидемического и эпизоотического процессов инфекции, вызванной вирусом гепатита Е, на территории Республики Беларусь. Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2019;8(1):11-22. DOI: https://doi.org/10.2441l/2305-3496-2019-11001

10. Давыдов В.В., Жаворонок С.В., Задора И.С., Новак Л.В, Карпенко Ф.Н., Левандовская О.В. [и др.]. Распространенность антител к вирусу гепатита Е в крови белорусских доноров. Медицинский журнал. 2022;(4):53-59. DOI: https://doi.org/10.51922/1818-426X.2022.4.53

11. Krumova-Valcheva GL, Di Bartolo I, Smith RP, Gyurova E, Mateva G, Milanov M, et al. Detection of HEV RNA Using One-Step Real-Time RT-PCR in Farrow-to-Finish Pig Farms in Bulgaria. Pathogens. 2023;12(5):673. DOI: https://doi.org/10.3390/pathogens12050673

12. Pischke S, Wedemeyer H. Hepatitis E virus infection: multiple faces of an underestimated problem. J Hepatol. 2013 May;58(5):1045-1046. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jhep.2012.12.013

13. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Доценко В.В., Амиантова И.И. [и др.]. Разработка рекомбинантного белка капсида вируса гепатита Е третьего генотипа: клонирование, экспрессия, очистка, оценка антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019;96(1):10-17. DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-1-10-17

14. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Милованова А.В., Аммур Ю.И. [и др.]. Получение рекомбинантного белка ORF3 вируса гепатита Е 3 генотипа и оценка его антигенных свойств. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018;95(5):46-53. DOI: http://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-5-46-53