Определение первичной резистентности Helicobacter pylori к левофлоксацину в образцах биоптатов слизистой оболочки желудка с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени

Цель исследования. Изучить первичную резистентность Helicobacter pylori (H. pylori) к левофлоксацину у жителей Гомельской области методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР РВ).
Материалы и методы. В исследование включено 170 пациентов с диагнозом «Гастрит и дуоденит», K29, медиана возраста — 48,5 года (25 и 75 % — 37 и 61 год). Согласно анкетным данным пациентов, эрадикационная терапия с применением левофлоксацина им не проводилась. Для определения резистентности H. pylori к левофлоксацину использовали метод ПЦР РВ.
Результаты. Из 170 исследуемых образцов ДНК 8 образцов имели сомнительный результат и согласно методике учета результатов подлежат перестановке с этапа выделения ДНК. Остальные 162 образца являлись положительными по гену β-актин (внутренний контрольный образец — ВКО) и учитывались при дальнейшем анализе (Ct, CY5 19,6–27,4). ДНК гена 16sRNA (Ct, ROX 19,5–30,04), cвидетельствующая об инфицировании бактерией, подтверждена в 152 образцах (93,8 %). ДНК гена gyrA (точечные мутации А259T, Т261C, G261A, G271A, G271T и A272G) выявлена в 19 из 152 образцов ДНК, и резистентность H. pylori к левофлоксацину составила 12,5 %, (Ct, Hex 23,2–30,7). Заведомо положительные контрольные пробы имели характерный рост кривых по соответствующим каналам детекции, в заведомо отрицательных — рост кривых не отмечен.
Заключение. Первичная резистентность H. pylori к левофлоксацину у жителей Гомельской области составила 12,5 %. Мутации гена gyrA являются наиболее чувствительным маркером для прогнозирования успешной эрадикации при использовании фторхинолонов, в частности левофлоксацина. ПЦР РВ является надежным методом выявления мутаций и позволяет проводить одновременное выявление ДНК H. pylori и резистентности к левофлоксацину, что значительно сокращает время исследования. 

1. Диагностика и лечение пациентов с заболеваниями органов пищеварения [Электронный ресурс]: клинический протокол: постановление Министерства здравоохранения Респ. Беларусь, 01 июня 2017 г., № 54, прил. 2. [дата обращения 2023 ноябрь 01]. Режим доступа: https://pravo.by/document/?guid=12551&p0=W21732115p&p1=1

2. Malfertheiner P, Megraud F, Rokkas T, Gisbert JP, Liou JM, Schulz C, Management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht VI/Florence consensus report. Gut. 2022 Aug 8: gutjnl-2022-327745. DOI: https://doi.org/10.1136/gutjnl-2022-327745

3. Yeo YH, Hsu CC, Lee CC, Ho HJ, Lin JT, Wu MS, et al. Taiwan Gastrointestinal Disease and Helicobacter Consortium. Systematic review and network meta-analysis: Comparative effectiveness of therapies for second-line Helicobacter pylori eradication. J Gastroenterol Hepatol. 2019 Jan;34(1):59-67. DOI: https://doi.org/10.1111/jgh.14462

4. Fischbach L, Evans EL. Meta-analysis: the effect of antibiotic resistance status on the efficacy of triple and quadruple first-line therapies for Helicobacter pylori. Aliment Pharmacol Ther. 2007 Aug 1;26(3):343-357. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-2036.2007.03386.x

5. Chen J, Li P, Huang Y, Guo Y, Ding Z, Lu H. Primary Antibiotic Resistance of Helicobacter pylori in Different Regions of China: A Systematic Review and Meta-Analysis. Pathogens. 2022 Jul 12;11(7):786. DOI: https://doi.org/10.3390/pathogens11070786

6. Ho JJC, Navarro M, Sawyer K, Elfanagely Y, Moss SF. Helicobacter pylori Antibiotic Resistance in the United States Between 2011 and 2021: A Systematic Review and Meta-Analysis. Am J Gastroenterol. 2022 Aug 1;117(8):1221-1230. DOI: https://doi.org/10.14309/ajg.0000000000001828

7. Андреев Д.Н., Маев И.В., Кучерявый Ю.А. Резистентность Helicobacter pylori в Российской Федерации: метаанализ исследований за последние 10 лет. Терапевтический архив. 2020;92(11):2-30. DOI: https://doi.org/10.26442/00403660.2020.11.000795

8. Fallone CA, Moss SF, Malfertheiner P. Reconciliation of Recent Helicobacter pylori Treatment Guidelines in a Time of Increasing Resistance to Antibiotics. Gastroenterology. 2019 Jul;157(1):44-53. DOI: https://doi.org/10.1053/j.gastro.2019.04.011

9. Kim SY, Chung J-W. Best Helicobacter pylori Eradication Strategy in the Era of Antibiotic Resistance. Antibiotics. 2020;9(8):436. DOI: https://doi.org/10.3390/antibiotics9080436

10. López-Gasca M, Peña J, García-Amado MA, Michelangeli F, Contreras M. Point Mutations at gyrA and gyrB Genes of Levofloxacin-Resistant Helicobacter pylori Isolates in the Esophageal Mucosa from a Venezuelan Population. Am J Trop Med Hyg. 2018 Apr;98(4):1051-1055. DOI: https://doi.org/10.4269/ajtmh.17-0478

11. Nishizawa T, Suzuki H. Mechanisms of Helicobacter pylori antibiotic resistance and molecular testing. Front Mol Biosci. 2014 Oct 24;1:19. DOI: https://doi.org/10.3389/fmolb.2014.00019

12. Guevara B, Cogdill AG. Helicobacter pylori: A Review of Current Diagnostic and Management Strategies. Dig Dis Sci. 2020 Jul;65(7):1917-1931. DOI: https://doi.org/10.1007/s10620020-06193-7

13. Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала инфицированного патогенными биологическими агентами III-IY групп патогенности [Электронный ресурс]: методические указания МУ 1.3.179403, МУ 1.3.1794-04. Минздрав России. 2003. – Прил. 7. [дата обращения 2023 ноябрь 01]. Режим доступа: https://meganorm.ru/Data2/1/4293855/4293855457.htm

14. Li Y, Lv T, He C, Wang H, C David S, et al. Evaluation of multiplex ARMS-PCR for detection of Helicobacter pylori mutations conferring resistance to clarithromycin and levofloxacin. Gut Pathog. 2020;12: Article 35. DOI: https://doi.org/10.1186/s13099-020-00373-6

15. Savoldi A, Carrara E, Graham DY, Conti M, Tacconelli E. Prevalence of Antibiotic Resistance in Helicobacter pylori: A Systematic Review and Meta-analysis in World Health Organization Regions. Gastroenterology. 2018 Nov;155(5):13721382.e17. DOI: https://doi.org/10.1053/j.gastro.2018.07.007

16. Tacconelli E, Carrara E, Savoldi A, Harbarth S, Mendelson M, Monnet DL, et al. Discovery, research, and development of new antibiotics: the WHO priority list of antibioticresistant bacteria and tuberculosis. Lancet Infect Dis. 2018 Mar;18(3):318-327. DOI: https://doi.org/10.1016/S1473-3099(17)30753-3

17. Shah SC, Iyer PG, Moss SF. AGAClinical Practice Update on the Management of Refractory Helicobacter pylori Infection: Expert Review. Gastroenterology. 2021 Apr;160(5):1831-1841. DOI: https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.11.059

18. Sah S, Chen L, Houghton J, Kemppainen J, Marko AC, Zeigler R, Latham GJ. Functional DNA quantification guides accurate next-generation sequencing mutation detection in formalin-fixed, paraffin-embedded tumor biopsies. Genome Med. 2013 Aug 30;5(8):77. DOI: https://doi.org/10.1186/gm481