Определение резистентности Helicobacter pylori к кларитромицину в образцах биоптатов слизистой оболочки желудка с использованием TaqManR® MGB-зондов

Цель исследования. Изучить первичную резистентность H. pylori к кларитромицину жителей Гомельской области методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР РВ) с использованием TaqMan® MGB-зондов.

Материалы и методы. В исследование включено 184 пациента с диагнозом гастрита и дуодениа, K29, медиана возраста — 48,5 года (25 и 75 % — 37 и 61 год). Согласно анкетным данным пациентов, эрадикационная терапия с применением кларитромицина не проводилась. Для определения резистентности H. pylori к кларитромицину использовали метод ПЦР РВ с применением TagMan® MGB-зондов.

Результаты. Все 184 исследуемых образца ДНК были положительными по гену Rnase P (ВКО) и учитывались при дальнейшем анализе (Ct, HEX 20,20–34,14). ДНК гена cagH (Ct, FAM 21,26–33,04), свидетельствующая об инфицировании бактерией, подтверждена в 152 образцах (82,6 %). ДНК гена 23SrRNA (точечные мутации A2142G и A2143G) выявлена в 16 из 152 образцов ДНК — 10,5 % (Ct, Hex 20,24–31,17). Заведомо положительные контрольные пробы имели характерный рост кривых по соответствующим каналам детекции, в заведомо отрицательных — рост кривых не отмечен.

Заключение. Первичная резистентность Н. pylori к кларитромицину у жителей Гомельской области составила 10,5 %, и применение тройной эрадикационной терапии первой линии, включающей ИПП, амоксициллин и кларитромицин, в качестве эмпирической в данном регионе согласуется с рекомендациями Mаастрихт III-VI и постановлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 01.06.2017 № 54: клинический протокол «Диагностика и лечение пациентов с заболеваниями органов пищеварения». Применение ПЦР РВ с использованием TaqMan® MGB-зондов обосновано для определения резистентности H. pylori к кларитромицину, назначения индивидуализированного лечения и оценки эффективности схем эрадикации.

1. Андреев ДН, Маев ИВ, Кучерявый ЮА. Резистентность Helicobacter pylori в Российской Федерации: метаанализ исследований за последние 10 лет. Терапевтический архив. 2020;92(11):24-30. DOI: https://doi.org/10.26442/00403660.2020.11.000795

2. Дехнич НН, Козлов СН. Кларитромицин (Клацид) – роль в эрадикации Helicobacter pylori-инфекции. Фарматека. 2007;(13):1-6.

3. Nishizawa T, Suzuki H. Mechanisms of Helicobacter pylori antibiotic resistance and molecular testing. Front Mol Biosci. 2014;1:19. DOI: https://doi.org/10.3389/fmolb.2014.00019

4. Диагностика и лечение пациентов с заболеваниями органов пищеварения: клинический протокол [Электронный ресурс]: постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь, 01 июня 2017 г., № 54, приложение 2. [дата доступа: 20.12.2022]. Режим доступа: https://minzdrav.gov.by/upload/dadvfiles/CProtokolКП%20Диагностика%20и%20лечение%20пациентов%20с%20заболеваниями%20органов%20пищеварения%2001.06.2017%20№%2054.pdf

5. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA, Gisbert JP, Kuipers EJ, et al. European Helicobacter and Microbiota Study Group and Consensus panel. Management of Helicobacter pylori infection-the Maastricht V/Florence Consensus Report. Gut. 2017 Jan;66(1):6-30. DOI: https://doi.org/10.1136/gutjnl-2016-312288

6. Malfertheiner P, Megraud F, Rokkas T, Gisbert JP, Liou JM, et al. European Helicobacter and Microbiota Study group. Management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht VI/ Florence consensus report. Gut. 2022 Aug 8:gutjnl-2022-327745. DOI: https://doi.org/10.1136/gutjnl-2022-327745

7. Allahverdiyev AM, Bagirova M, Caliskan R, Tokman HB, Aliyeva H, et al. Isolation and diagnosis of Helicobacter pylori by a new method: microcapillary culture. World J Gastroenterol. 2015 Mar 7;21(9):2622-2628. DOI: https://doi.org/10.3748/wjg.v21.i9.2622

8. Волков АН, Начева ЛВ. Молекулярно-генетические методы в практике современных медико-биологических исследований. Часть I: теоретические основы ПЦР-диагностики. Фундаментальная и клиническая медицина. 2020;5(4):133-140. DOI: https://doi.org/10.23946/2500-0764-2020-5-4-133-140

9. Heather JM, Chain B. The sequence of sequencers: The history of sequencing DNA. Genomics. 2016 Jan;107(1):1-8. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ygeno.2015.11.003

10. Ребриков ДВ, Саматов ГА, Трофимов ДЮ, [и др.]. ПЦР в реальном времени. Под ред. Д. В. Ребрикова. 9-е изд. Москва: Лаборатория знаний; 2021. 223 с.

11. Nagy A, Vitásková E, Černíková L, Křivda V, Jiřincová H, et al. Evaluation of TaqMan qPCR System Integrating Two Identically Labelled Hydrolysis Probes in Single Assay. Sci Rep. 2017 Jan 25;7:41392. DOI: https://doi.org/10.1038/srep41392

12. Kutyavin I, Lokhov S, Lukhtanov E, Reed MW. Chemistry of minor groove binder-oligonucleotide conjugates. Curr Protoc Nucleic Acid Chem. 2003 Aug; Chapter 8:Unit 8.4. DOI: https://doi.org/10.1002/0471142700.nc0804s13

13. Qiu J, Wilson A, El-Sagheer AH, Brown T. Combination probes with intercalating anchors and proximal fluorophores for DNA and RNA detection. Nucleic Acids Res. 2016 Sep 30;44(17):e138. DOI: https://doi.org/10.1093/nar/gkw579

14. Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IY групп патогенности. Методические указания МУ 1.3.1794-03, МУ 1.3.1794-04. Минздрав России; 2003. Приложение 7. [дата обращения: 10.11.2022]. Режим доступа: https://docs.cntd.ru/document/1200035464

15. Peng X, Song Z, He L, Lin S, Gong Y, et al. Gastric JuiceBased Real-Time PCR for Tailored. Helicobacter Pylori Treatment: A Practical Approach. Int J Med Sci. 2017 May 15;14(6):595-601. DOI: https://doi.org/10.7150/ijms.18996

16. Current European concepts in the management of Helicobacter pylori infection. The Maastricht Consensus Report. European Helicobacter Pylori Study Group. Gut. 1997 Jul;41(1):8-13. DOI: https://doi.org/10.1136/gut.41.1.8

17. Graham DY, Lee YC, Wu MS. Rational Helicobacter pylori therapy: evidence-based medicine rather than medicinebased evidence. Clin Gastroenterol Hepatol. 2014 Feb;12(2):17786.e3; Discussion e12-3. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cgh.2013.05.028

18. McNicholl AG, Marin AC, Molina-Infante J, Castro M, Barrio J, et al. Randomised clinical trial comparing sequential and concomitant therapies for Helicobacter pylori eradication in routine clinical practice. Gut. 2014 Feb;63(2):244-249. DOI: https://doi.org/10.1136/gutjnl-2013-304820

19. Mégraud F. H pylori antibiotic resistance: prevalence, importance, and advances in testing. Gut. 2004 Sep;53(9):13741384. DOI: https://doi.org/10.1136/gut.2003.022111

20. Taguchi H, Kanmura S, Maeda T, Iwaya H, Arima S, Sasaki F, Nasu Y, Tanoue S, Hashimoto S, Ido A. Helicobacter pylori eradication improves the quality of life regardless of the treatment outcome: A multicenter prospective cohort study. Medicine (Baltimore). 2017 Dec;96(52):e9507. DOI: https://doi.org/10.1097/MD.0000000000009507

21. Поздеева АО, Поздеев ОК, Гуляев ПЕ, Валеева ЮВ, Савинова АН. Современное развитие схем эрадикации Helicobacter pylori. Инфекция и иммунитет. 2021;11(6):10371049. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-CDO-1679

22. Воропаева АВ, Воропаев ЕВ, Баранов ОЮ, Платошкин ЭН, Шафранский АА. Молекулярно–генетическое тестирование мутаций гена 23S рРНК H.pylori, определяющих резистентность к кларитромицину. Медико-биологические проблемы жизнедеятельности. 2010;(4):30-35.

23. Mestrovic A, Perkovic N, Tonkic A, Sundov Z, Kumric M, Bozic J. Personalized Approach in Eradication of Helicobacter pylori Infection. Antibiotics (Basel). 2022 Dec 21;12(1):7. DOI: https://doi.org/10.3390/antibiotics12010007